微生物菌種保藏方法

　　1、傳代保存法：有些微生物當遇到冷凍或干燥等處理時，會很快死亡，因此在這種情況下，只能求助于傳代培養保存法。傳代培養就是要定期地進行菌種轉接、

　　培養后再保存，它是基本的微生物保存法，例如酸奶等常用生產菌種的保存。傳代保存時，培養基的濃度不宜過高，營養成分不宜過于豐富，尤其是碳水化合物的

　　濃度應在可能的范圍內盡量降低。培養溫度通常以稍低于適生長溫度為好。若為產酸菌種，則應在培養基中添加少量碳酸鈣。　　一般地，大

　　多數菌種的保藏溫度以5℃為好，像厭氧菌、霍亂弧菌及部分病原真菌等微生物菌種則可以使用37℃進行保存，而蕈類等大型食用菌的菌種則可以室溫直接保存。

　　傳代培養保存法雖然簡便，但其缺點也很明顯，如：①菌種管棉塞經常容易發霉；②菌株的遺傳性狀容易發生變異；③反復傳代時，菌株的病原性、形成生理活性物

　　質的能力以及形成孢子的能力等均有降低；④需要定期轉種，工作量大；⑤雜菌的污染機會較多。

　　微生物菌種保藏箱參數：

　　【型    號】FYL-YS-1028L

　　【額定電壓】AC220V

　　【額定頻率】50Hz

　　【輸入功率】360w

　　【額定電流】2.4A

　　【噪    音】50dB（A）00

　　【箱體尺寸】1267×680×2115 mm

　　【有效容積】1028L

　　【氣候類型】N

　　【溫度范圍】2～48℃

　　【制冷劑用量】R134a（382g）

　　1、產品結構為立式箱體。主體分為三部分：電氣控制系統，制冷系統、顯示系統。

　　2、箱體內部采用密度聚氨酯整體發泡，具有重量輕、保溫性能好等特點。

　　3、微電腦溫度控制器，數碼顯示，具有低溫報警、溫感器故障報警和斷電報警功能，防止出現意外。

　　4、溫感探頭，自動顯示箱體內部溫度、濕度，便于隨時觀察箱體內溫濕度變化。

　　5、采用新型風道設計，鋼快速風扇，厚壁快速導冷銅管，溫度度。

　　6、制冷系統合理，采用強制空氣循環，確保箱體內恒溫無死角。降溫速度快，設定的溫度在短時間里，即可達到設置溫度要求。

　　7、使用雙層強度鋼化玻璃，保溫效果好，透明度，便于隨時觀察箱體內部存放的物品。

　　8、采用丹佛斯壓縮機，運轉平衡，噪音低，使用壽命長。

　　9、箱體采用的彩涂板，經噴涂工藝，表面色澤柔和，內部隔層可任意放寬和縮小，便于存放不同物品。

　　10、箱體內部具備照明設施，方便夜間觀察儲存的物品。

　　11、安全雙門鎖設計，實現雙人雙管，防止隨意開啟。

　　12、箱體底部選用超出普通萬向輪承載量2倍的腳輪， 止動底腳方便使用。

　　產品配置清單

　　1、說明書1本

　　2、保修卡1張

　　3、合格1張

　　4、擱  架10個

　　5、鑰  匙2把

　　2、液體石蠟覆蓋保存法：該法較前一種

　　方法保存菌種的時間更長，適用于霉菌、酵母菌、放線菌及需氧細菌等的保存。此法可防止干燥，并限制氧的供給而達到削弱微生物代謝的目的。其具有方

　　法簡便的優點，同時也適用于不宜冷凍干燥的微生物（如產孢能力低的絲狀菌）的保存，而某些細菌如固氮菌、乳酸桿菌、明串珠菌、分枝桿菌、紅螺菌及沙門氏菌

　　等和一些真菌如卷霉菌、小克銀漢霉、毛霉、根霉等不宜采用此法進行保存。

　　3、載體保存法：即將微生物吸附在適當載體上進行干燥保存的方法。常用的有方法包括以下幾種，如

　　①土壤保存法：主要用于能形成孢子或孢囊的微生物菌種的保藏。方法是在的土壤中加入菌液，立即在室溫下進行干燥或使菌體繁殖后再干燥，然后冷藏或在

　　室溫下密封保存。保存用的土壤原則上以肥沃的耕土為宜，土壤需風干、粉碎、過篩和。使微生物在土壤中繁殖后進行干燥保存的方法是：取適量土壤（5克）

　　置于塞有棉塞的試管中，加水或加入充分稀釋的液體培養基（以含水量為土壤持水量的60%為宜），然后高壓。再將需保存的微生物進行大量臺式，培養

　　至菌絲能用肉眼確認的程度為止，移入干燥器中經短時間干燥或風干后密封，冷藏或室溫保存。　　②砂土保存法：取清潔的砂，篩去掉大砂

　　粒，并用磁鐵吸去砂中鐵屑，再用NaOH溶液、10%HCl溶液和水交替清洗數次，干燥后，置于試管或安瓶管中保持2～m深，再經干熱后，加入

　　1ml菌種培養液，經充分混勻后，放入真空干燥器中，完全干燥后熔封保存。也可用二份洗凈的砂（經HCl預處理）和一份貧瘠、過篩的黃土攙和后，再進

　　行菌種保藏。　　③硅膠保存法：以6～16目的無色硅膠代替砂子，干熱后，加入菌液。加菌液時，由于硅膠的吸附熱常使溫度升高，因而需設法加以冷卻。

　　④磁珠保存法：將菌液浸入素燒磁珠（或多孔玻璃珠）后再進行干燥保存的一種方法。在螺旋口試管中裝入1/2管高的硅膠（或無水CaSO4），上鋪玻璃

　　棉，再放上10～20粒磁珠，經干熱后，接入菌懸液，后冷藏、室溫保藏或減壓干燥后密封保藏。本法對酵母菌很有效，特別適用于根瘤菌，可保存長達兩

　　年半時間。　　⑤麩皮保存法：在麩皮內加入60%的水，經后臺式培養，后干燥保藏。　　⑥紙片（濾紙）保存法：將紙片浸入培養液或菌懸液中，常壓或減壓干燥后，置于裝有干燥劑的容器內進行保存。

　　4、懸液保存法：即使微生物混懸于適當溶液中進行保存的方法。常用的有，　　①蒸餾水保存法：適用于霉菌、酵母菌及絕大部分放線菌，將其菌體懸浮于蒸餾水中即可在室溫下保存數年。本法應注意避免水分的蒸發。　　②糖液保存法：適用于酵母菌，如將其菌體懸浮于10%的蔗糖溶液中，然后于冷暗處保存，可長達10年。除此之外，也可使用緩沖液或食鹽水等進行保存。

　　5、寄主保存法：即令微生物侵入其寄主后加以保存的方法。

　　6、冷凍保存法：適用于抗凍力強的微生物。這些微生物可在其菌體外遭受凍結的情況下而不受損傷，而對其它大多數微生物而言，無論在外凍結還是在內凍結，都會對菌體造成損傷，因此當采用這種保藏方法時，應注意以下幾點，　　①要選擇適于冷凍干燥的菌齡；　　②要選擇適宜的培養基，因為某些微生物對冷凍的抵抗力，常隨培養基成分的變化而顯示出巨大差異；　　③要選擇合適的菌液濃度，通常菌液濃度越高，生存率越高，保存期也越長；　　④在菌液內不添加電解質（如食鹽等）；　　⑤可在菌液內添加甘油等保護劑，以防止在冷凍過程中出現菌體大量死亡的現象。同樣，也可添加各種糖類、去纖維和脫脂牛乳等具有良好保護效果的溶劑，但對有些微生物而言，不加保護劑時更有效。　　⑥原則上應盡快進行冷凍處理，但當加入保護劑時，可靜置一段時間后再進行處理。　　⑦就動物而言，應在-20℃范圍內以1℃/min左右的速度緩慢降溫，此后必須盡快降到貯藏溫度；而對絕大多數微生物而言，則不必如此，如結構較為復雜的原蟲則可在-35℃范圍內進行緩慢降溫，而噬菌體則必需采用上述的二階段法進行冷凍；　　⑧若進行保存，則貯藏溫度越低越好；　　⑨取用冷凍保存的菌種時，應采取速融措施，即在35～40℃溫水中輕輕振蕩使之迅速融解。而就厭氧菌來說，則應選擇靜置融化的措施。當冷凍菌融化后，應盡量避免再次冷凍，否則菌體的存活率將顯著下降。　　常用的冷凍保存法包括：

　　①低溫冰箱保存法（-20℃、-50℃或-85℃）：低溫冷凍保存時使用螺旋口試管較為方便，也可在棉塞試管外包裹塑料薄膜。保存時菌液加量不宜過多，

　　有些可添加保護劑。此外，也可用φ5mm的玻璃珠來吸附菌液，然后把玻璃珠置于塑料容器內，再放入低溫冰箱內進行保存的。　　②干冰保存法（-70℃左右）：即將菌種管插入干冰內，再置于冰箱內進行冷凍保存。　　③液氮保存法（-196℃）：是適用范圍廣的微生物保存法。其操作步驟如下，　　a、裝安瓶管：使用盡量濃厚的菌體懸浮于含有適當防凍劑（保存霉菌不用防凍劑）的溶液中，將0.2～1ml的這種溶液分裝于安瓶中，或在裝有分散劑的安瓶中直接臺式，或將菌絲體瓊脂塊直接懸浮于分散劑中。　　b、熔封安瓶管：若直接貯存于氣相液氮中（-150℃～-170℃）時，則不需熔封。　　c、檢查安瓶管是否熔封良好：即在4℃下，將熔封安瓶管在適當的色素溶液中浸泡2～30分鐘后，觀察有無色素進入安瓶。　　d、緩慢冷卻：將熔封安瓶管置于小罐中，然后用液氮氣以約1℃/min的速度冷卻至-25℃左右，也可在-20℃～-25℃的冰箱內緩慢冷卻30～60min。　　e、速冷：后浸入液氮中快速冷卻至-196℃。

　　7、冷凍干燥保存法：其原理是先將微生物冷凍，然后在減壓下利用升華現象除去水分。事實上，從菌體中除去大部分水分后，的生理活動就會停止，因此

　　可以達到維持生命狀態的目的。該方法適用于絕大多數微生物菌種（包括噬菌體和立克次氏體等）的保存。在進行冷凍干燥時，需注意以下幾個問題：

　　a、冷凍干燥前的培養條件：先檢驗菌種純度。一般地說，將待保存的微生物在營養豐富且容易增菌的培養基上進行培養為宜；菌齡以達到對數生為好；若

　　為有芽孢或孢子的微生物，則以芽孢和孢子形成以后進行保存為好；菌液濃度以高為好，如細菌應達到109～1010/ml。　　b、菌株號碼等的標記：可在安瓶外側標記或在安瓶內封入標簽。　　c、安瓶的準備：將安瓶在2%HCl中浸泡過夜，自來水沖洗3次后，蒸餾水刷凈，干燥，塞棉塞，貼標簽，干熱或溫熱后，60℃恒溫干燥。　　d、添加保護劑：常用的保護劑有脫脂乳、12%蔗糖、加7.5%葡萄糖的普通肉湯以及加7.5%葡萄糖的等等。

　　8、甘油管保藏法：在5ml菌種保藏管中，將等體積的菌懸液和40%的甘油充分混勻后，于-20℃冰箱中保存。